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蔬果中維生素C含量的檢測方法

更新時(shí)間:2015-07-16點(diǎn)擊次數:1455

蔬果中維生素C含量的檢測方法

維生素C又叫抗壞血酸(Ascorbicid),廣泛存在于植物組織中,新鮮的水果、蔬菜中含量較多。是一種水溶性小分子生物活性物質(zhì),也是人體需要量大的一種維生素。維生素C具有還原性(其結構式如圖1),可以與許多氧化劑發(fā)生氧化還原反應,因此可以利用其還原性測定維生素C的含量。目前食品中測定維生素C含量的方法主要有碘量法,是利用維生素C的氧化還原性為基礎的一種氧化還原方法。岡其酸度不易把握,碘需要標定且易揮發(fā),而Vc不易穩定保存,使測定結果易出現偏差,且這種方法不適合微量分析;國標GB/T6195-1986是采用2,6一二氯靛酚滴定法。利用樣品溶液由藍色轉變?yōu)榉奂t色來(lái)辨別其滴定終點(diǎn)的到達。但是多數水果、蔬菜樣品其提取液都具有一定的色澤而導致滴定終點(diǎn)不明顯,使測定準確度降低。另外還有熒光光譜分析法 J、紫外一可見(jiàn)分光度法、色譜法、電化學(xué)法等,這些方法都存在著(zhù)一定的局限性,如操作過(guò)程復雜,所用試劑不穩定,速度慢、背景¨干擾大。近年來(lái),建立的測定Vc的其他方法還有催化動(dòng)力學(xué)和光度法相結合的方法,及VC傳感器測定方法,固定pH滴定法等。

該論文將對蔬菜、水果常用的維生素C含量的檢測方法進(jìn)行綜述、比較。


1原子吸收分光光度法

利用原子吸收分光光度法問(wèn)接測定維生素C的含量,是利用維生素C可以與一些金屬離子發(fā)生氧化還原反應,通過(guò)測定反應掉的金屬離子的量,進(jìn)而間接計算出維生素c的含量。

1.1以銀離子作為氧化劑的間接原子吸收分光光度法

以銀離子作為氧化劑的間接原子吸收分光光度法,是利用維生素C分子中的有二烯醇基具強還原性,可被硝酸銀氧化為去氫維生素C,同時(shí)產(chǎn)生黑色銀沉淀

沉淀經(jīng)離心分離后,將分離得到的沉淀用硝酸溶解后,再利用原子吸收分光光度計測定銀離子的含量,從而接測得維生素C含量,具體測定方法如下:

配制一系列濃度的維生素C標準溶液,依次吸取一定量的維生素C標準溶液置于10mL離心管中,分別加入2mL(1mg/mL) Ag+標準溶液,然后加水使總體積為4mL,搖勻,在室溫下避光放置35min離心分離棄去上清液,用2mL超純水洗滌沉淀3次,然后用l:1的濃硝酸3mL溶解沉淀,移入50mL的容量瓶中,加水稀釋至刻度。噴入空氣-乙炔火焰分別測定其吸光度,以維生素C標準溶液的濃度為橫坐標,以測得的吸光度值為縱坐標繪制標準曲線(xiàn)。后將處理過(guò)的待測樣按上述方法測定其維生素C含量。

上述方法巾維生素C標準溶液及樣品的配制都是利用2%的檸檬酸作為溶劑,并在棕色瓶中保存,原因是維生素C在溶液中不穩定,遇氧氣、光、熱、堿性物質(zhì)易受破壞,而在適當的酸性條件下比較穩定,用2%的檸檬酸溶液來(lái)配制維生素C標準溶液,減緩了維生素C被氧化的速度,同時(shí)消除了一定外界因素的十擾,使得測定結果比較穩定。

1.2 以銅離子作為氧化劑的間接原子吸收分光光度法

文獻中報道了以銅離子作為氧化劑的間接原子吸收分光光度法。該方法也是利用維生素C在酸性介質(zhì)中維生素C可將Cu2+定量的還原為Cu+,然后Cu+與SCN-反應生成CuSCN沉淀,在高速離心機下有效地分離出CuSCN沉淀,洗滌后再經(jīng)濃硝酸溶解,用原子吸收法測定沉淀中的含銅量,即可推知樣品中維生素C的含量。具體測定方法如下:

分別吸取1mL配制的含一定量維生素C的標準溶液(隨配隨用)(分別含維生素C 50、100、200、300、400、500 μg)和樣品提取液,依次放置于已編號的15mL離心管中,各加入1mLCuSO4飽和溶液、1mL濃度為2%硫氰酸銨溶液、0.5mL鹽酸-醋酸鈉緩沖液和0.5 mL飽和NaCl溶液充分混和,稍后離心分離,棄去上層清液,小心地用少量水洗滌沉淀2~3次(注意每次用水不能超過(guò)1 mL),加入0.5mL硝酸溶解后,轉移至lO0mL的容量瓶中加水定容至刻度線(xiàn),搖勻。分別用原子吸收分光光度計測定其含銅量,由所得的維生素C含量的標準曲線(xiàn),可以得到相應樣品的試驗結果。

該方法所得的試驗結果相對標準偏差RSD在5%以?xún)燃訕嘶厥章试?6.56%~100.67%,其精密度和準確度均達到痕量分析要求。此方法的線(xiàn)性相關(guān)系數R=O 9989,表明相關(guān)性很好。

2紫外可見(jiàn)分光光度法

利用紫外分光光度法測定維生素C的含量是基于維生素c在紫外光區有特征吸收,但是因為維生素C結構中具有不飽和鍵,具有還原性,不易穩定存在,直接測定誤差較大。所以在利用紫外分光光度法測定時(shí),維生素標準溶液和待測樣的配制條件非常重要。曾國富,黃玉英研究發(fā)現,維生索C在CTAB-C5H11OH-H2O微乳液體系中非常穩定,它存在于微乳液滴膜的內側,與滲透進(jìn)入液滴膜外側的溶液氧接觸的機會(huì )極少,該體系能極大地提高維生素C的穩定性。

鄭京平等利用維生素C具有對紫外產(chǎn)生吸收和對堿穩定的特性,建立了紫外分光光度快速測定水果、蔬菜維生素c的新方法。根據維生素C具有對紫外產(chǎn)生吸收和對堿不穩定的特性,于波長(cháng)243nm處測定樣品溶液與堿處理樣品兩者吸光度之差,通過(guò)查校準曲線(xiàn),即可計算樣品巾維生素C的含量。此法操作簡(jiǎn)單、快速準確、重現性好,結果令人滿(mǎn)意。特別適合含深色樣品的測定。實(shí)驗結果表明該方法簡(jiǎn)單易行,結果準確、靈敏度高,檢出限低,可快速測定水果、蔬菜中維生素C,值得推廣應用。

張立科等介紹了在0~450μg/mL線(xiàn)性范圍內,以cu2+作催化劑,以溶解氧將還原型維生素C氧化為在246.0 nm處無(wú)吸收的氧化型Vc,實(shí)現了樣品各紫外干擾成分的本底校正,建立了種測定果蔬Vc的新方法。該方法中維生素C破壞條件的選擇尤為重要,確定條件為:Cu用量為30 g,反應溫度為70℃,反應時(shí)間為20min,加熱條件下,反應速度快,無(wú)需加掩蔽劑。方法簡(jiǎn)便、快速、準確,測定了香蕉、西紅柿等果蔬中的VC含量,結果令人滿(mǎn)意。經(jīng)多次實(shí)驗得出該方法RsD在0.32%~0.89%之間,實(shí)際測定了香蕉、西紅柿等樣品中的VC的含量,檢出限為0.2791g/mL,加標回收率在97.16%~100.18%之間 。

3液相色譜法

前面介紹的方法由于在使用中有一定的限制,操作復雜、前處理較麻煩。因此在使用中有較大的局限性,目的已逐漸被液相色譜法所取代。HPLC法具有檢測速度快、操作簡(jiǎn)單、實(shí)驗結果可靠等特點(diǎn)。

王艷穎,姜國斌等采用HYPERSIL-C8fz譜柱、濃度0.1%的草酸作流動(dòng)相的液相色譜法,分析了草莓中的維生素c含量,取得了的效果。HPLC檢測條件如下:

流動(dòng)相0.1%草酸溶液,流速1.0 mL/min;檢測波長(cháng)254 nm,進(jìn)樣量5μL,柱箱溫度3O℃。該方法分析中受樣品中其他雜質(zhì)的影響較小。測定草莓中維生素C的含量,回收率為97.4%~102.1%,說(shuō)明該方法具有所需試劑少、穩定、操作簡(jiǎn)便等特點(diǎn)。精密度實(shí)驗的相對標準偏差小于3%,說(shuō)明該方法重復性和再現性都是比較高的。

陳昌云等采用0.05 mol/L磷酸二氫鉀緩沖液:甲醇=80:20(v/v)作流動(dòng)相。流速為1.0 mL/min,二極管陣列檢測器,檢測波長(cháng)為254 nm。測定蜜柚中維生素C含量在質(zhì)量濃度為20~100mg/L范圍內有良好的線(xiàn)性關(guān)系,方法回收率為92.4%~107.5%,相對標準偏差小于2%。

4 結語(yǔ)

測定維生素C含量方法很多,各種方法各有優(yōu)缺點(diǎn),因為維生素C自身的不穩定,導致了很多方法測定結果誤差較大,所以對維生素C穩定存在條件的探索非常重要。液相色譜法因為測定較準確、靈敏度高、選擇性好,有較好的發(fā)展前景,是目前發(fā)展較快的一種方法。